1分鐘學實驗：如何用atp熒光檢測儀準確測定菌液濃度？

在微生物相關的實驗中，大腸桿菌是*常用的菌株。

關于大腸桿菌濃度的測定以及計算有許多方法。今天就給大家介紹以分光光度計以及熒光光度計連續(xù)監(jiān)測的方法，通過檢測培養(yǎng)液吸光強度和熒光強度隨時間的變化并建立微生物生長曲線，確定吸光強度和熒光強度檢測閾值。

據(jù)此測定達到閾值吸光強度和熒光強度所需時間，推導并驗證了檢測時間與菌初始濃度之間的線性關系，建立閾值檢測曲線。

利用定時培養(yǎng)檢測方法建立定時檢測曲線。采用上述兩種定量方法所有微生物檢測約10h可完成。

1、將菌種接種于斜面培養(yǎng)24 h，用接種環(huán)挑取菌體于無菌水中，然后依次稀釋10倍制備一系列濃度梯度的菌懸液，并用97孔定量盤檢測其濃度。

2、確定檢測波長在無菌的試劑中加入大腸桿菌后37℃培養(yǎng)12 h，以無菌的試劑為空白，用紫外分光光度計對其進行全波長掃描以確定其**檢測波長。在激發(fā)光為365 nm條件下，用熒光光度計進行全波長掃描以確定熒光物質的**檢測波長。

3、確定檢測國值用無菌水將培養(yǎng)試劑溶解，制備兩倍濃度的培養(yǎng)試劑。將等體積的兩倍濃度試劑和菌懸液混合后密封，37℃培養(yǎng)。每隔20 min檢測吸光強度和熒光強度變化，根據(jù)過程變化確定檢測閾值。

4、定時培養(yǎng)方式2-3 mL體系在比色皿封閉體系中或無色透明5 mL玻璃瓶中培養(yǎng)，每隔一定時間檢測培養(yǎng)體系中410 nm處及365 nm激發(fā)光所激發(fā)熒光變化。此種培養(yǎng)方式便于無菌培養(yǎng)、連續(xù)檢測或定時檢測，不需要連續(xù)取樣。過程簡單、操作方便。

此方法通過atp熒光檢測儀檢測和觀察微生物生長過程中的變化，可確定吸光強度（△A=0.1）和熒光強度（△F=0.1）檢測閾值。經(jīng)過數(shù)學推導和實驗驗證，建立大腸桿菌初始濃度與閾值檢測時間之間的線性關系。利用此曲線方程，只需記錄閾值所需的檢測時間即可推算出水中微生物的初始濃度，計算過程十分簡單。